ATCC細(xì)胞操作指南

細(xì)胞和細(xì)胞株

凍存的ATCC 細(xì)胞株和雜交瘤細(xì)胞株通過(guò)干冰運(yùn)輸。收到凍存細(xì)胞后，需立即解凍復(fù)蘇，去除二甲基亞砜（DMSO）后進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。

如果不立即復(fù)蘇培養(yǎng)細(xì)胞，必須將細(xì)胞凍存管放置于液氮罐氣

凍存細(xì)胞的復(fù)蘇和培養(yǎng)

1. 準(zhǔn)備細(xì)胞培養(yǎng)皿或細(xì)胞培養(yǎng)瓶，及產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)推薦的相應(yīng)細(xì)胞培養(yǎng)基，平衡溫度和pH（CO2），37℃水浴加熱細(xì)胞培養(yǎng)基。

2. 小心取出裝有細(xì)胞的凍存管，保持管蓋擰緊，將凍存管蓋以下的部分置于37℃水浴，輕微攪拌以幫助解凍。解凍過(guò)程應(yīng)該盡快，

短于2分鐘或待最后一塊小冰晶體剛?cè)诨磳⒓?xì)胞凍存管取出水浴。

3. 給取出的細(xì)胞凍存管表面噴灑70%乙醇配制的消毒劑，用無(wú)菌紙或紗布拭干。之后的操作步驟應(yīng)在生物安全柜中無(wú)菌操作。

4. 小心擰開(kāi)凍存管的頂部，將管內(nèi)容物用1 mL移液槍轉(zhuǎn)移到含9 mL培養(yǎng)基的無(wú)菌離心管中。離心5到7分鐘（125 × g ），

小心吸去上清液以去除抗凍劑（DMSO），避免丟失細(xì)胞沉淀。將細(xì)胞沉淀重懸于1或2 mL配好的培養(yǎng)基中。將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到含有

培養(yǎng)基的培養(yǎng)容器，輕輕搖晃使細(xì)胞均勻分布。生長(zhǎng)較慢的細(xì)胞株可重懸于5～8 mL培養(yǎng)基并轉(zhuǎn)移到T25培養(yǎng)瓶。

生長(zhǎng)較快的細(xì)胞株可重懸于12～20 mL培養(yǎng)基并轉(zhuǎn)移到T75培養(yǎng)瓶。ATCC記載有各細(xì)胞株的具體生長(zhǎng)狀況及培養(yǎng)方法。

5. 將細(xì)胞培養(yǎng)容器置于細(xì)胞培養(yǎng)箱，在37℃，5%二氧化碳濃度的培養(yǎng)條件下進(jìn)行孵育。細(xì)胞培養(yǎng)24小時(shí)后在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)

狀況（請(qǐng)參閱: *注2）。

*注1：雖然大多數(shù)細(xì)胞株可以在一種以上的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，但細(xì)胞的特征可能會(huì)在更換不同種培養(yǎng)基時(shí)發(fā)生變化。為保證最佳效果，

請(qǐng)用ATCC推薦的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞，若配套培養(yǎng)基不能購(gòu)買(mǎi)，ATCC可以提供培養(yǎng)基配方。

*注2：某些細(xì)胞株，如雜交瘤株，可能需要幾天的時(shí)間才從凍存狀態(tài)下恢復(fù)正常生長(zhǎng)。細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng)第一天可能會(huì)呈現(xiàn)較低的細(xì)胞活力

并產(chǎn)生一些細(xì)胞碎片。度過(guò)這一時(shí)期后，細(xì)胞會(huì)恢復(fù)并進(jìn)入指數(shù)增長(zhǎng)期。相層存儲(chǔ)。請(qǐng)不要將細(xì)胞存儲(chǔ)在-130℃以上的溫度。

如果溫度不夠低，高于-130℃，細(xì)胞活力會(huì)迅速下降。