豬瘟病毒阻斷ELISA 抗體檢測試劑盒使用說明書

【產(chǎn)品名稱】

通用名：豬瘟病毒阻斷ELISA 抗體檢測試劑盒

英文名：Blocking ELISA Kit For Detection of Antibodies to Classical Swine Fever Virus

【包裝規(guī)格】 96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒

【預(yù)期用途】 豬瘟是由豬瘟病毒（Classical Swine Fever Virus，CSFV）引起的豬的一種高度接觸性、出血性和致死性傳染病，其特征為高熱稽留和微血管壁變性而引起的廣泛出血、壞死、梗塞等，慢性以纖維素壞死性腸炎為特征。

本試劑用于檢測豬血清中豬瘟病毒抗體，可用于豬瘟病毒疫苗免疫效果評價。

【試劑盒組成】

【儲存及有效期】 2～8℃保存，有效期12個月。

    包被板開封后請于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個月。

【適用儀器】 含630nm波長的酶標儀，37℃恒溫設(shè)備，可調(diào)微量移液器。

【樣品準備】

1.取動物全血，待血液凝固后，以4000r/min 離心10分鐘，收集血清；或待血液凝固后自然析出血清，再收集血清。血清應(yīng)清亮，無溶血。

2.用樣品稀釋液將待檢血清按1:1稀釋（如100μl血清加入100μl樣品稀釋液中，混勻）。陰、陽性對照不用稀釋。

3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液)，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶加熱使其溶解后再使用。

溫馨提示：先使用血清稀釋板稀釋完所有的待檢血清、再將稀釋好的血清轉(zhuǎn)移到抗原包被板上，使反應(yīng)時間一致。

【檢驗方法】

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復(fù)至室溫。

2.取所需用量酶標板條，設(shè)陰性、陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存，每孔加入工作洗滌液 300μl，無需靜置，甩掉板孔中的洗滌液，重復(fù)洗滌2次，最后一次拍干。

3.陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。

4.混勻，蓋好蓋板膜，置37℃（推薦水浴）避光反應(yīng)2小時。

5.甩去孔內(nèi)液體，每孔加300μl工作洗滌液，無需靜置，甩掉板孔中的洗滌液，重復(fù)洗滌5次，最后一次拍干。

6.每孔加酶標記物100μl，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應(yīng)30分鐘。

7.洗滌，同步驟5。

8.每孔加入底物顯色液100μl，置室溫( 20～25℃)避光反應(yīng)10分鐘。

9.每孔加入終止液50μl，混勻，10分鐘內(nèi)于630nm測定各孔吸光值。 

【參考值】 實驗正常的情況下，陰性對照的平均OD值即ODNC應(yīng)≥0.6，陽性對照的平均OD值即ODPC應(yīng)≤0.5。

【檢驗結(jié)果的判定】

1.PI（阻斷率）=（1- 陰性對照平均A值(樣本A值)）×100%。

2.PI≥40%為陽性；PI<40%為陰性。

3.本實驗結(jié)果為陰性時表明豬只抗體水平不足，建議補打相應(yīng)疫苗。

【試驗方法的局限性】

    該試驗僅作為定性檢測豬血清、血漿中豬瘟病毒抗體，根據(jù)PI值高低可作抗體水平強、中、弱的粗略評估。

【注意事項】

1.實驗操作時需戴手套、穿工作衣，嚴格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實驗廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

2.終止液具有腐蝕性，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。

3.若試劑盒陰陽性對照、酶標記物出現(xiàn)少量懸浮物，屬于正?，F(xiàn)象。

4.酶標板從冷藏環(huán)境中取出時應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋，未用完的酶標板需放入有干燥劑的密封袋中保存。

5.濃縮洗滌液在低溫時容易結(jié)晶，使用時需恢復(fù)至室溫以溶解。

6.洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。

7.用于檢測的樣品應(yīng)保持新鮮。

8.試驗結(jié)果的判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。

9.不同批號試劑組分不得混用。