T4 GP61 Primase試劑T4 噬菌體復(fù)制分為依賴于起始子的起始復(fù)制和依賴于重組酶的復(fù)制。由起始復(fù)制產(chǎn)生的3'-ssDNA作為重組復(fù)制的第一步鏈侵入

的組份， 該3'-ssDNA被T4 gp32 蛋白所覆蓋，同時將T4 UvsY募集到此；T4 UvsY作為T4 UvsX的loader將其運(yùn)載至此，

于此同時gp32被置換下來， UvsX和UvsY形成突觸結(jié)構(gòu)， 然后侵入同源的雙鏈形成D-Loop， 一旦形成D-Loop，

UvsX即被置換下來。D-loop被置換鏈作為滯后鏈合成的模板，很快被gp32結(jié)合。隨后， 解旋酶loader gp59與gp32覆蓋的

DNA復(fù)制叉結(jié)合，將gp41/61運(yùn)載至此， gp61蛋白合成寡核苷酸片段促進(jìn)滯后鏈DNA的合成，而gp41通過解旋模板而促進(jìn)先

導(dǎo)鏈的DNA合成。最后，聚合酶的滑板蛋白T4 gp45蛋白和其loder蛋白 gp44/62與先導(dǎo)鏈相結(jié)合，促進(jìn)聚合酶gp43的組裝，

T4 gp45蛋白將gp43運(yùn)載至復(fù)制叉處后啟動先導(dǎo)鏈和滯后鏈的合成，gp44/62隨后從復(fù)制叉處解離。因此，

gp59作為解旋酶gp41的loader在gp41引導(dǎo)的DNA先導(dǎo)鏈合成中起到重要作用。

組分

組分名稱100 μg

T4 gp59 Loader Protein (1 μg/μl)100 μl

儲存

-20℃可保存3年。

T4 GP61 Primase試劑恒溫擴(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測結(jié)果，可以看到檢測反應(yīng)<20min(達(dá)平臺期)。

應(yīng)用實(shí)例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。OG變色法為終點(diǎn)變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測結(jié)果。

應(yīng)用實(shí)例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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