葉綠體是光合作用的細(xì)胞器，在光合作用研究中，常需要用提取的葉綠體展開下游研究工作，葉綠體中所含的色素主要有兩大類

，葉綠素(包括葉綠素a和葉綠素b)和類胡蘿卜素(包括胡蘿卜素和葉黃素)，它們與類囊體膜上的蛋白質(zhì)結(jié)合，成為色素蛋白復(fù)合

體，其中葉綠素又稱葉綠體色素(Chlorophyll)；類胡蘿卜素是一種脂溶性且具有營養(yǎng)特性的化合物，給植物和動(dòng)物提供天然色素

，是重要的抗氧化劑，并有能力轉(zhuǎn)換為必需維生素，類胡蘿卜素可預(yù)防細(xì)胞，組織和基因損毀，增強(qiáng)身體免疫系統(tǒng)，抵御感染，

減少癌癥風(fēng)險(xiǎn)，保護(hù)心臟。

植物類黃酮檢測試劑盒(微板法)檢測原理是類胡蘿卜素不溶解于水，而溶于有機(jī)溶劑，以有機(jī)溶劑粗提類

胡蘿卜素，根據(jù)朗伯-比爾定律，某有色溶液的吸光度(A)與其中溶質(zhì)濃度(C)和液層厚度(L)成正比，即A=αCL，其中α為比例常

數(shù)，當(dāng)溶液濃度以百分比濃度為單位，層液厚度為1cm時(shí)，α為該物質(zhì)的吸光系數(shù)。在本試劑盒情況下葉綠素a、葉綠素b、

類胡蘿卜素分別在665nm、649nm、470nm處有最大吸收波，根據(jù)經(jīng)驗(yàn)公式可計(jì)算出葉綠素a、葉綠素b、總?cè)~綠素、類胡蘿卜

素含量，主要用于植物組織中葉綠素、類胡蘿卜素的提取以及以酶標(biāo)儀定量檢測葉綠素a、葉綠素b、總?cè)~綠素、類胡蘿卜素含量

。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。

操作步驟(僅供參考)：

自備材料：

1、蒸餾水

2、電子天平、研缽或勻漿器、離心管或試管

3、低溫離心機(jī)、恒溫箱或水浴鍋、酶標(biāo)儀、酶標(biāo)板

操作步驟(僅供參考)：

1、準(zhǔn)備樣品∶

①植物樣品︰取1g植物組織或水果中層果肉，加入2.5ml PAL Lysis Buffer，冰浴情況下充分搗碎研磨或勻漿，4℃ 10000r/min

離心15~20min，留取上清液，-20℃凍存，用于苯丙氨解氨酶的檢測。

②血漿、血清和尿液樣品︰血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于該試劑盒的測定，-20℃凍存，用于苯丙解氨的檢測。

③細(xì)胞或組織樣品∶取恰當(dāng)細(xì)胞或組織裂解液，如果有必要需進(jìn)行適當(dāng)勻漿，4℃ 10000r/min離心15~20min，取上清液，

-20℃凍存，用于苯丙酸解氨酶的檢測。④高活性樣品︰如果樣品中含有較高活性的苯丙解氨酶，可以使用蒸餾水或PAL

Lysis Buffer稀釋進(jìn)行恰當(dāng)?shù)南♂尅?/span>

2、PAL加樣∶

取96孔板，按照下表設(shè)置對照孔、測定孔，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并

注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的PAL活性過高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測定，樣品的檢測最好能設(shè)置2平行孔，

求平均值。

加入物（μl）對照孔測定孔

蒸餾水150100

待測樣本5050

PAL Assay Buffer-50

3、PAL檢測︰

以對照孔為對照(調(diào)零)，酶標(biāo)儀立即測定290nm處測定孔的吸光度(記為   A測定0);40℃準(zhǔn)確孵育1h，立即加入10μl PAL終止

液終止反應(yīng)(備選方案)，以對照孔為對照調(diào)零，酶標(biāo)儀立即測定290nm處測定孔的吸光度(記為A測定1)。

注意︰加入PAL終止液終止反應(yīng)為非必須步驟，可37℃準(zhǔn)確孵育1h后直接以對照孔為對照調(diào)零，酶標(biāo)儀立即測定290nm處測定

孔的吸光度。

注意事項(xiàng)∶

1、待測樣品中不能含有酶抑制劑，同時(shí)需避免反復(fù)凍融。

2、獲得上清液為PAL酶液，應(yīng)盡快檢測，亦可-20°℃保存。

3、如果沒有可測定紫外區(qū)的酶標(biāo)儀和酶標(biāo)板，也可以使用紫外分光光度計(jì)和石英比色皿，但應(yīng)注意比色杯的最小檢測體積。

4、每次檢測指標(biāo)不宜過多，否則操作時(shí)間不一，有可能導(dǎo)致樣本間的差異。5、為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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